【48812】ELISA技能的操作关键

时间: 2024-06-14 09:46:53 |   作者: -25℃医用低温冰箱

产品介绍

  优质的试剂，杰出的仪器和正确的操作是确保ELISA检测成果精确牢靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的构成不同而有所差异，国内医学查验一般均用板式点。本文将叙说板式ELISA各个操作进程的留意关键，珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与特别仪器合作运用，两者均有具体的运用说明，严厉遵循规则操作，必能得出精确的成果。

  可用作ELISA测定的标本非常广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其间某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均平等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只需待血清天然凝结、血块缩短后即可获得。除特别情况外，在医学查验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可平等运用。血清标本可按惯例办法收集，应留意避开溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为符号的ELISA测定中，溶血标本或许会添加非特异性显色。 血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中或许含有内源性HRP，也会产生假阳性反响。如在冰箱中保存过久，其间的可产生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。 一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超越一周测定的需低温冰存。冻住血清融解后，蛋白质部分浓缩，散布不均，应充沛混匀宜轻缓，防止气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上激烈振动。混浊或有沉积的血清标本应先离心或过滤，弄清后再检测。重复冻融会使抗体效价下跌，所以测抗体的血清标本如需保存作屡次检测，宜少数分装冰存。保存血清自收集时就应留意无菌操作，也可参加恰当防腐剂。

  试剂的预备 按试剂盒说明书的要求预备实验中需用的试剂。ELISA顶用的蒸馏水或去离子水，包含用于洗刷的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液运用pH计丈量较正。从冰箱中取出的实验用试剂应待温度与室温平衡后运用。试剂盒中本次实验不需用的部分应及时放回冰箱保存。 加样 在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，防止加在孔壁上部，并留意不行溅起，不行产生气泡。 加标本一般用微量加样器，按规则的量参加板孔中。每次加标本应更换吸嘴，防止产生穿插污染，也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定（如间接法ELISA）需用稀释的血清，可在试管中按规则的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中参加稀释液，再在其间参加血清标本，然后在微型震动器上震动1分钟以确保混和。加酶结合物运用液和底物运用液时可用定量多道加液器，使加液进程敏捷完结。 保温 在ELISA中一般有两次抗原抗体反响，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反响的完结需求有必定的温度和时刻，这一保温进程称为温育(incubation)，有人称之为孵育，在ELISA中似不恰当。 ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上产生。以抗体包被的夹心法为例，参加板孔中的标本，其间的抗原并不是都有平等的和固相抗结合的时机，只需最靠近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体触摸。这是一个逐渐平衡的进程，因而需经分散才能够做到反响的结尾。在这以后参加的酶符号抗体与固相抗原的结合也相同如此。这便是怎么回事ELISA反响总是需求一段时刻的温育。 温育常选用的温度有43℃、37℃、室温文4℃（冰箱温度）等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的适宜温度。在树立ELISA办法作反响动力学研讨时，实验标明，两次抗原抗体反响一般在37℃经1-2小时，产品的生成可达高峰。为加快反响，可进步反响的温度，有些实验在43℃进行，但不宜选用更高的温度。抗原抗体反响4℃更为完全，在放射免疫测定中多使反响在冰箱中过夜，以构成最多的沉积。但因所需时刻太长，在ELISA中一般不予选用。 保温的方法除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均选用水浴，可将ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度敏捷平衡。为防止蒸腾，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此刻可让反响板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA板应放在湿盒内，湿盒要选用传热性杰出的资料如金属等，在盒底垫湿的纱布，最终将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规则的温度，特别是在气温较低的时分更应如此。无论是水浴仍是湿盒温育，反响板均不宜叠放，以确保各板的温度都能敏捷平衡。室温温育的反响，操作时的室温应严厉约束在规则的范围内，规范室温温度是指20-25℃，但具体操作时可根据说明书的要求操控温育。室温温育时，ELISA板只需平置于操作台上即可。应留意温育的温度和时刻应按规则力求精确。为确保这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板一起测定。